產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品參數(shù)
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服務介紹：
| 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 價格 |
| HKF6018 | 流式-JC-1 | 樣 | 80 |
一、實驗簡介
線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件。JC-1是一種理想的用于檢測線粒體膜電位的熒光探針，可以檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。其原理是，當線粒體膜電位較高時，JC-1聚集在線粒體基質(zhì)中，形成聚合物，488nm激發(fā)時的最大發(fā)射波長為590nm，可以產(chǎn)生紅色熒光，在流式上表現(xiàn)為FL1和FL2雙陽性;當線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體基質(zhì)中，此時JC-1為單體，488nm激發(fā)時最大發(fā)射波長為527nm，可以產(chǎn)生綠色熒光，形成流式圖匯總所有細胞FL1為陽性。凋亡細胞則大多為FL1單陽性。不同熒光顏色的轉(zhuǎn)變反應線粒體膜電位的變化，常用紅綠熒光的相對比例衡量線粒體去極化的比例。
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二、流式JC-1實驗步驟
1、收集細胞：細胞懸液轉(zhuǎn)入離心管中，1000rpm離心5min收集細胞,棄上清。
2、PBS洗滌細胞：加入3ml 4℃預冷的PBS完全重懸細胞，1000rpm離心5min，棄上清。沉淀震蕩混勻。
3、細胞計數(shù)：移取10微升在血細胞計數(shù)儀上進行細胞計數(shù),調(diào)整細胞為0.5-1×10^6/ml。
4、裝載探針：按照1:500用無血清培養(yǎng)基稀釋JC-1，使終濃度為10ug/mL。
5、孵育探針：37°C細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘，每隔3-5分鐘顛倒混勻一下，使探針和細胞充分接觸，用無血清的培養(yǎng)液洗滌細胞三次，以去除未進入細胞內(nèi)的探針。
6、上機檢測：流式細胞儀使用激發(fā)波長Ex=488nm，發(fā)射波長FL1(Em=525±20nm);FL2(Em=585±20 nm)，用Flow Jo軟件分析結果。
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1997
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3006
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2142
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1618
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