RIPA 總蛋白裂解液

蛋白質(zhì)生物學(xué) 試劑

• 價(jià)格￥120
• 規(guī)格100ml
• 貨號(hào)HKW2011
• 單位瓶
• 品牌HaoKebio

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【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】

RIPA 裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞及組織快速裂解液。RIPA解液裂解組織、細(xì)胞得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的 PAGE、 Western 等對(duì)蛋白活性沒有嚴(yán)格要求的實(shí)驗(yàn)。

本產(chǎn)品主要成分包含 50 mM Tris-HCl (pH 7.4)，150 mM NaCl， 1 mM EDTA，1mM EGTA,1% NP-40、5%甘油。本產(chǎn)品適用于動(dòng)物或植物組織及細(xì)胞樣品， 也可用于真菌或細(xì)菌樣品。

【產(chǎn)品組成?】

【儲(chǔ)存與運(yùn)輸】

冰袋（wet ice）運(yùn)輸；4℃避光保存，有效期 18 個(gè)月。

【使用方法】

自備蛋白酶抑制劑。RIPA 裂解液在臨用前需加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。以下使用方法中提到的 RIPA 裂解液均指已添加蛋白酶抑制劑。

組織樣品實(shí)驗(yàn)：

1.組織塊用預(yù)冷 PBS洗滌，去除血污，剪成細(xì)小碎塊置于勻漿器中。

2. 加入 10 倍組織體積 RIPA 裂解液低溫勻漿。注意，RIPA 裂解液的使用量可按照約每 50 mg 組織與 1 mL 裂解液的比例添加。如組織蛋白含量較低，可降低裂解液的用量，以提高粗提溶液中的蛋白濃度。

3.將勻漿液轉(zhuǎn)移至 1.5 mL 離心管中，振蕩。冰浴 30 min，期間每 10 min 用移液器反復(fù)吹打，確保組織細(xì)胞完全裂解。

4. 12000 g離心 5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。

貼壁細(xì)胞樣品實(shí)驗(yàn)：

1. 用 PBS 清洗細(xì)胞 2-3 次，最后一次徹底吸干殘留液。
2. 按照 6 孔板每孔細(xì)胞 250 μL 裂解液的比例吸取 RIPA 裂解液于細(xì)胞培養(yǎng)板、瓶?jī)?nèi)，反復(fù)晃動(dòng)培養(yǎng)板或瓶，使裂解液與細(xì)胞充分接觸 3-5 min。
3. 用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下，收集到離心管中。
4. 12000 g 離心 5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。

懸浮細(xì)胞樣品實(shí)驗(yàn)：

1. 離心收集細(xì)胞。
2. 按照 6 孔板每孔細(xì)胞 250 μL 裂解液的比例將細(xì)胞液與 RIPA 裂解液混合，振蕩。
3. 冰浴 30 min，期間每 10 min 用移液器反復(fù)吹打數(shù)次，確保細(xì)胞完全裂解。
4. 12000 g 離心 5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。

細(xì)菌或真菌樣本實(shí)驗(yàn)：

1. 取 1 mL 菌懸液，離心去上清，PBS 洗滌一次，充分去除液體。渦旋使菌體盡量分散。
2. 加入 100-200 μL RIPA 裂解液，輕輕渦旋使菌體與裂解液充分混勻。
3. 冰浴 10 min，期間每 2 min 用移液器反復(fù)吹打數(shù)次，確保菌體完全裂解。
4. 12000 g 離心 5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。

【注意事項(xiàng)】

1. 組織或細(xì)胞裂解時(shí)若會(huì)出現(xiàn)粘稠狀?？捎靡埔浩鞣磸?fù)吹打或振蕩器振蕩，直至呈液狀為止。如果一直較稠，可再加入適量裂解液。
2. 本試劑不含有蛋白酶抑制劑，需自備蛋白酶抑制劑并在臨用前加入。
3. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，并佩戴一次性手套。