杭州浩克生物組織前處理
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產(chǎn)品介紹
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【產(chǎn)品信息】
| 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
| IF雙染+TUNEL（三染） | HKF2040 | 張 | 300元 |
石蠟切片免疫熒光實驗步驟
1、?石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min-無水乙醇Ⅰ6min -95%酒精6min-85%酒精
6min蒸餾水洗。
2、?抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿檸檬酸抗原修復(fù)液（PH6.0）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進行抗原修復(fù)，中火8min
?；?min中低火7min，此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。
3、?阻斷內(nèi)源性過氧化物酶：切片加上3%的雙氧水，室溫孵育25min，將玻片置PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。
4、?血清封閉:在組化圈內(nèi)滴加3%BSA?均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。
5、?加一抗：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在圈內(nèi)滴加按一定比例稀的抗體覆蓋組織。切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。
6、?加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min。
7、?信號放大:將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min?。滴加相對應(yīng)顏色Flare信號放大試劑，3-5min.將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min?。雙標或者多標的實驗從這一步結(jié)束后重復(fù)步驟2-7，標記第二個，最后在進入步驟2。
8、?修復(fù)：組織切片置于盛滿EDTA修復(fù)液（PH8.0）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進行抗原修復(fù)，中火8min停火8min
中低火7min，此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。
9、?加試劑tunel
工作液：按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑TdT酶和反應(yīng)液試劑1:50混合，加到圈內(nèi)覆蓋組織，切片平放于濕盒內(nèi)，37℃恒溫箱孵育1.5小時，濕盒內(nèi)加少量水保持濕度。
10、DAPI復(fù)染細胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加
DAPI染液，避光室溫孵育10min。
11、封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
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