【儲(chǔ)存與運(yùn)輸】

本試劑常溫保存運(yùn)輸，有效期一年。

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】

自備蘇木素分化液、蘇木素返藍(lán)液、二甲苯、梯度乙醇、無(wú)水乙醇、中性樹(shù)膠等。

【使用方法】

一、樣本前處理

1、對(duì)于石蠟切片：切片依次經(jīng)二甲苯脫蠟 12 min，更換新鮮的二甲苯脫蠟 12 min，無(wú)水乙 醇 5min，新鮮無(wú)水乙醇 5 min，95%乙醇 5 min，85%乙醇 5 min， 自來(lái)水洗。

2、對(duì)于冰凍切片：-20℃保存的冰凍切片需靜置恢復(fù)至室溫,經(jīng)所需固定液固定后水洗。

二、HE 染色

1、蘇木素染色：上述處理好的切片，進(jìn)入蘇木素染液染色 5min， 自來(lái)水洗；

2、分化：切片經(jīng)蘇木素分化液 1-3s， 自來(lái)水流水充分沖洗；

3、返藍(lán)：蘇木素返藍(lán)液返藍(lán) 10-15s， 自來(lái)水流水充分沖洗；

4、伊紅染色：切片經(jīng) 85%乙醇脫水 2min，然后進(jìn)入伊紅染液(醇溶)中染色 10-15s，經(jīng) 95% 乙醇分色 5-10s,經(jīng)兩次無(wú)水乙醇脫水各 3min；

5、透明：切片入二甲苯透明 3min，更換新鮮的二甲苯再透明 3min。

6、封片：滴加中性樹(shù)膠進(jìn)行封片。

【注意事項(xiàng)】

1.染色后用特定溶液將組織中過(guò)多結(jié)合的染液脫去，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為分化作用，組織在經(jīng)蘇 木素染色后，必須經(jīng)過(guò)分化去除組織中過(guò)多結(jié)合及非特異性吸附的染料，才能進(jìn)行伊紅染 色，確保細(xì)胞核與胞漿顯色分明。分化過(guò)程中，根據(jù)組織切片厚度、組織類(lèi)型等結(jié)合鏡下 觀察適當(dāng)調(diào)整分化時(shí)間。

2.HE 染色中蘇木素染色后的返藍(lán)很重要。蘇木素在酸性條件下為離子狀態(tài)，呈紅色；在堿 性條件下呈藍(lán)色。組織切片經(jīng)酸性分化液分化后呈紅色或粉紅色，需立即水洗終止分化， 再用弱堿性溶液使蘇木素，這個(gè)過(guò)程就是返藍(lán)作用。如果沒(méi)有專(zhuān)用的返藍(lán)液，用溫水浸洗 也能使細(xì)胞核返藍(lán)，只是所需時(shí)間略長(zhǎng)。                                            

3.蘇木素及伊紅染色程度可以根據(jù)染色需要進(jìn)行調(diào)整染色時(shí)間。                       

4.蘇木素染液可重復(fù)使用多次，當(dāng)組織或細(xì)胞著色明顯偏淺或顏色異常時(shí)請(qǐng)更換新的染 液。

5.用于染色后脫水的無(wú)水乙醇純度需大于 99.9%。如果乙醇含水，伊紅會(huì)褪色導(dǎo)致染色不 均勻。

6.伊紅染液(醇溶)可反復(fù)使用數(shù)次，當(dāng)組織著色明顯偏淺時(shí)建議更換新的染液。

7.操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，佩戴一次性手套。