產(chǎn)品介紹:

本產(chǎn)品專(zhuān)門(mén)用于Western blot實(shí)驗(yàn)中膜的封閉和抗體的稀釋?zhuān)酒泛刑厥庥袡C(jī)化合物成份，可顯著縮短實(shí)驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間，從而提高實(shí)驗(yàn)效率。本產(chǎn)品含有不同分子量范圍的惰性蛋白，可有效降低背景，并且保護(hù)抗體的活性，使用本產(chǎn)品稀釋好的抗體工作液，通常可以在4℃存放3個(gè)月以上。本產(chǎn)品含有病理級(jí)防腐劑，可以兼容HRP，因此本產(chǎn)品即可以稀釋一抗（包括磷酸化一抗），也可以稀釋HRP標(biāo)記的一抗或二抗。本產(chǎn)品還可以稀釋熒光標(biāo)記的一抗和二抗。不適用的情形：本產(chǎn)品含有BSA，不能用于稀釋抗BSA一抗。本產(chǎn)品為半透明膠體，如有不溶成團(tuán)或成塊聚集物請(qǐng)勿使用。

保存條件:

4度保存，有效期12個(gè)月。

使用方法:

1、電泳和轉(zhuǎn)移，按常規(guī)方法進(jìn)行。

2、封閉（可選）。轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，把印跡膜放置于反應(yīng)盒中，用洗滌液（TBST或PBST）涮洗3-5秒后棄去洗滌液，加入適量（完全淹沒(méi)膜）的本產(chǎn)品置于水平搖床上緩慢搖動(dòng)，室溫或37℃封閉~5分鐘即可。注意：如后續(xù)步驟稀釋液仍使用本產(chǎn)品，則可省略封閉步驟（即涮洗后棄去洗滌液，直接加入稀釋好的一抗）。如后續(xù)步驟稀釋液用其他稀釋液，或一抗反應(yīng)時(shí)間計(jì)劃延長(zhǎng)至25分鐘以上時(shí)，則本步驟不建議省略。使用本產(chǎn)品封閉5分鐘即可達(dá)到理想效果，延長(zhǎng)時(shí)間通常不會(huì)有太大區(qū)別。如需以本步驟作為實(shí)驗(yàn)停點(diǎn)，可以將此步驟在4℃靜置進(jìn)行（30分鐘至24小時(shí)）。

3、一抗孵育。

3.1 提前用本產(chǎn)品稀釋好一抗。封閉結(jié)束后，棄去封閉液，加入適量（完全淹沒(méi)膜）的一抗。如有多余的一抗工作液，可放回4℃存放。注意：封閉結(jié)束后，可以不洗滌直接加入一抗。如需洗滌，可用常規(guī)洗滌液簡(jiǎn)單洗滌一次。

3.2 將反應(yīng)盒置于水平搖床，先快速搖勻一抗，再緩慢搖動(dòng)室溫或37℃孵育10-25分鐘，部分高親和力抗體可以縮短至5分鐘以?xún)?nèi)。

3.3 一抗孵育結(jié)束推薦使用PBST或TBST緩沖液洗滌，將反應(yīng)盒置于水平搖床，先加入適量洗滌液快速涮洗兩次（每次3-5秒），再用洗滌液洗滌3次，每次1分鐘。

4、二抗孵育（如果一抗為HRP直標(biāo)一抗，則無(wú)需此步，直接進(jìn)行第5步）。

4.1提前用本產(chǎn)品稀釋好二抗。一抗洗滌完后，加入適量（完全淹沒(méi)膜）的二抗。如有多余的二抗，可放回4℃存放。

4.2 將反應(yīng)盒置于水平搖床，先快速搖勻二抗，再緩慢搖動(dòng)室溫或37℃孵育8-15分鐘。

4.3 二抗孵育結(jié)束推薦使用PBST或TBST緩沖液洗滌，將反應(yīng)盒置于水平搖床，先加入適量洗滌液快速涮洗兩次（每次3-5秒），再用洗滌液洗滌3次，每次1分鐘。

5、洗滌結(jié)束后即可加底物進(jìn)行化學(xué)發(fā)光成像儀檢測(cè)或暗室顯影操作成像。

注意:

本品使用前請(qǐng)先置于室溫25℃或37℃恒溫箱平衡溫度以確保使用效果。孵育過(guò)程室溫25℃或37℃對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)明顯影響，但室溫低于25℃時(shí)推薦輔助加熱恒溫孵育。

提示:

1、若首次使用本產(chǎn)品，可能需要優(yōu)化抗體稀釋比。建議先固定二抗?jié)舛龋ㄒ话?.05-0.1μg/mL），固定一抗和二抗反應(yīng)時(shí)間后再優(yōu)化測(cè)試一抗?jié)舛取?/p>

2、如有個(gè)別結(jié)果不理想情況可適當(dāng)調(diào)整一抗、二抗?jié)舛然蛳礈斓臅r(shí)間，適當(dāng)優(yōu)化成像或者曝光時(shí)間。

3、使用本產(chǎn)品稀釋好的一抗或二抗，通常可以在4℃存放3個(gè)月以上。但不同一抗或二抗存放時(shí)間長(zhǎng)度有所不同，具體穩(wěn)定期請(qǐng)自行判斷。

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