杭州浩克生物熒光原位雜交（FISH、IF 雙染）
| Tunel（白光）檢測(cè) | 200元/張 |
| Tunel（熒光）檢測(cè) | 200元/張 |
| IF Tunel 雙染 | 250元/張 |
| Tunel( 芯片） | 550元/張 |
| 原位雜交（DAB 顯色） | 240元/張 |
| 原位雜交（FISH 單標(biāo)） | 240元/張 |
| 原位雜交（FISH、IF 雙染） | 300元/張 |
| 原位雜交（FISH 雙標(biāo)） | 300元/張 |
| 原位雜交（FISH 三標(biāo)） | 350元/張 |
| 原位雜交（芯片） | 500元/張 |
| 探針設(shè)計(jì)合成（一端標(biāo)記、BIO） | 600元/張 |
| 探針設(shè)計(jì)合成（一端標(biāo)記、DIG） | 1000元/張 |
| 探針設(shè)計(jì)合成（一端標(biāo)記、FAM） | 1100元/張 |
| 探針設(shè)計(jì)合成（一端標(biāo)記、Cy3） | 1900元/張 |
| 探針設(shè)計(jì)合成（兩端標(biāo)記、BIO） | 1200元/張 |
| 探針設(shè)計(jì)合成（兩端標(biāo)記、DIG） | 1960元/張 |
| 探針設(shè)計(jì)合成（兩端標(biāo)記、FAM） | 1400元/張 |
| 探針設(shè)計(jì)合成（兩端標(biāo)記、Cy3） | 2500元/張 |
原位雜交與免疫熒光原理：原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。免疫熒光就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體或抗原上，與其相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。
應(yīng)用
通過原位雜交及免疫熒光雙染，可以在組織細(xì)胞中對(duì)核酸分子和蛋白指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行共定位、以及定性分析，可以用來從共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。
實(shí)驗(yàn)流程
石蠟切片熒光探針原位雜交與免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)步驟
1. 組織固定、脫水、切片、石蠟切片脫蠟至水;
2. 消化：切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘，滴加蛋白酶K消化;
3. 預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液，37°C孵育1h。
4. 雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針 雜交液濃度 ，恒溫箱 度雜交過夜。
5. 雜交后洗滌：SSC洗滌;
6. 孵育一抗、二抗：滴加一抗，4℃過夜，后PBS洗3×5min;滴加相應(yīng)二抗，室溫孵育50min，PBS洗3×5min;
7. DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min;
8. 鏡檢拍照;
樣品保存運(yùn)輸
組織冰凍切片
組織切取需要部位，厚度在2mm 左右, PBS漂洗，干冰運(yùn)輸或立即置于固定液中。組織固定有原位雜交固定液
(動(dòng)物)、原位雜交固定液(植物)、原位雜交固定液(較嫩植物)，室溫固定12小時(shí)(根據(jù)組織大小)以上，植物組織固定時(shí)需常溫抽真空30min，再用純水或PBS清洗兩次后， 放入15%蔗糖溶液中，4℃脫水8小后，換30%蔗糖溶液4℃過夜。冰切時(shí)佩戴手套。冰凍切片放-20℃或-80℃保存?zhèn)溆谩?br> 組織石蠟切片
組織切取需要部位，厚度在2mm 左右, PBS漂洗后立即固定。動(dòng)物組織用原位雜交固定液(動(dòng)物)，植物組織用原位雜交固定液(植物)或原位雜交固定液(較嫩植物)，植物組織固定時(shí)需常溫抽真空30min，固定12h以上。固定完成后脫水、包埋、切片。梯度酒精配制需用DEPC水。石蠟常規(guī)保存?zhèn)溆谩?br> 標(biāo)本運(yùn)輸
冰凍切片：標(biāo)本放原位雜交固定液中，常溫運(yùn)輸;冰凍切片-20℃運(yùn)輸;新鮮組織干冰運(yùn)輸。交接單隨樣本一起，單獨(dú)封裝。
石蠟切片：標(biāo)本放原位雜交固定液中，常溫運(yùn)輸;石蠟切片常溫運(yùn)輸。交接單隨樣本一起，單獨(dú)封裝。
細(xì)胞爬片：細(xì)胞爬片加原位雜交固定液后密封4℃運(yùn)輸。交接單隨樣本一起，單獨(dú)封裝。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1. mRNA為檢測(cè)對(duì)象時(shí)，需嚴(yán)格要求實(shí)驗(yàn)環(huán)境經(jīng)無RNA酶處理;
2. FISH切片保存時(shí)間較短，應(yīng)盡快取圖;
3. 不同的抗體與原位雜交進(jìn)行雙標(biāo)時(shí)，可能會(huì)有影響，必要時(shí)進(jìn)行一定的實(shí)驗(yàn)步驟調(diào)整，以避免相互之間的影響;
上一篇: 原位雜交（FISH,單標(biāo)）下一篇: 原位雜交(FISH雙標(biāo)）
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