杭州浩克生物
名稱：熒光原位雜交(FISH雙標)
標本要求：石蠟，冰切，細胞爬片
產(chǎn)品周期：5個工作日。
項目介紹：
1. 原位雜交原理：原位雜交是指將特定標記的已知順序核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交，從而對特定核酸順序進行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。
2. 所需器材：
脫水機G-JT12s，包埋機G-L5/p5,病理切片機RM2016，凍臺G-P1，烤箱GFL-70/230,組織攤片機G-KDP，載玻片及蓋玻片，正置熒光顯微鏡，成像系統(tǒng)，恒溫箱，高壓滅菌鍋，移液槍，鐘擺搖床。
3. 主要試劑：DEPC。原位雜交固定液。PBS緩沖液。20×SSC洗脫液。蛋白酶K。DAPI?？篃晒獯銣绶馄瑒ｋs交液。
實驗步驟：
細胞爬片熒光探針原位雜交雙標實驗步驟
1、細胞爬片固定：細胞爬片置于4%多聚甲醛(DEPC)固定20min，于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。
2、消化：基因筆畫圈，根據(jù)不同組織不同指標特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml)消化8min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。
3、預雜交：滴加預雜交液37°恒溫箱1h。
4、雜交：傾去預雜交液，滴加含探針1雜交液，37度雜交過夜。
5、雜交后洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC 37°洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌
6、雜交：傾去預雜交液，滴加含探針2雜交液，37度雜交過夜。
7、DAPI復染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。
8、鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm,發(fā)藍光;FAM(488)綠光激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555 nm，發(fā)綠光;CY3紅光激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm，發(fā)紅光。)
細胞爬片熒光探針原位雜交雙標實驗結果判讀
DAPI染出來的細胞核在紫外的激發(fā)下為藍色，陽性表達為相應熒光素標記的熒光。FAM(488)為綠光，cy3為紅光。mRNA原位雜交顯示結果理論為胞漿陽性，少數(shù)核陽性屬正常。micRNA與lncRNA不同指標表達定位不同。根據(jù)表達量不同熒光亮度有強弱。
| Tunel（白光）檢測 | 200元/張 |
| Tunel（熒光）檢測 | 200元/張 |
| IF Tunel 雙染 | 250元/張 |
| Tunel( 芯片） | 550元/張 |
| 原位雜交（DAB 顯色） | 240元/張 |
| 原位雜交（FISH 單標） | 240元/張 |
| 原位雜交（FISH、IF 雙染） | 300元/張 |
| 原位雜交（FISH 雙標） | 300元/張 |
| 原位雜交（FISH 三標） | 350元/張 |
| 原位雜交（芯片） | 500 元起 |
| 探針設計合成（一端標記、BIO） | 600元/條 |
| 探針設計合成（一端標記、DIG） | 1000 元 / 條 |
| 探針設計合成（一端標記、FAM） | 1100 元 / 條 |
| 探針設計合成（一端標記、Cy3） | 1900 元 / 條 |
| 探針設計合成（兩端標記、BIO） | 1200 元 / 條 |
| 探針設計合成（兩端標記、DIG） | 1690 元 / 條 |
| 探針設計合成（兩端標記、FAM） | 1400 元 / 條 |
| 探針設計合成（兩端標記、Cy3） | 2500 元 / 條 |
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